腦脊髓炎動物模型構建
一、實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型
(模擬多發性硬化/MS)
1. 經典誘導方法
模型類型 | 適用動物 | 抗原與佐劑 | 疾病進程 |
---|---|---|---|
主動免疫EAE | C57BL/6小鼠 | - MOG??-??肽(100-200 μg) - 完q弗氏佐劑(CFA)+ 百日咳毒素(PTx,200 ng) | 慢性進展性,12-14天發病 |
SJL/J小鼠 | - PLP???-???肽(50-100 μg) - CFA + PTx | 復發-緩解型,7-10天發病 | |
過繼轉移EAE | B6/SJL小鼠 | - 體外用MOG激活T細胞,靜脈回輸(5×10?個細胞) | 快速發病(3-5天),避免佐劑干擾 |
2. 關鍵步驟
免疫方案:
皮下注射抗原乳化液(脊柱兩側4點,共100 μL)。
PTx腹腔注射(0天及2天,各200 ng)。
疾病評分(0-5分標準):
0: 無癥狀
1: 尾部無力
2: 后肢輕癱
3: 后肢完q癱瘓
4: 四肢癱瘓
5: 瀕死狀態
3. 注意事項
品系差異:C57BL/6小鼠需PTx增強血腦屏障穿透,SJL/J小鼠易復發。
病理驗證:脊髓切片LFB染色(脫髓鞘)、CD4+ T細胞浸潤(免疫組化)。
二、病毒性腦脊髓炎模型
(如西尼羅河病毒、單純皰疹病毒等)
1. 西尼羅河病毒(WNV)模型
動物:C57BL/6小鼠(6-8周齡)。
方法:
腳墊注射WNV(103-10? PFU),3-7天后出現神經癥狀(震顫、癱瘓)。
檢測:
腦組織病毒載量(qPCR)、神經元死亡(Fluoro-Jade C染色)。
2. 單純皰疹病毒(HSV-1)腦炎模型
方法:
鼻腔接種HSV-1(10? PFU),病毒沿嗅神經入腦。
病理:
海馬和皮層炎癥(Iba1+小膠質細胞活化)、病毒抗原(HSV-gB染色)。
三、細菌/寄生蟲性腦脊髓炎模型
1. 結核性腦膜炎(TBM)模型
動物:BALB/c小鼠。
方法:
尾靜脈注射結核分枝桿菌(H37Rv株,10? CFU),4周后腦干出現肉芽腫。
2. 弓形蟲腦炎模型
方法:
腹腔注射剛地弓形蟲(ME49株,102-103速殖子),慢性期(4周后)形成腦包囊。
四、腦脊髓炎動物模型構建選擇與驗證要點
研究目標 | 推薦模型 | 檢測終點 |
---|---|---|
自身免疫脫髓鞘 | MOG??-??誘導EAE | 臨床評分、脊髓LFB染色 |
病毒感染致神經損傷 | WNV顱內接種 | 病毒載量、神經元凋亡 |
血腦屏障破壞機制 | 過繼轉移EAE | 熒光s鈉滲透率、ZO-1蛋白表達 |
慢性神經炎癥 | 弓形蟲ME49感染 | 腦包囊計數(PAS染色)、IFN-γ水平 |
五、注意事項
倫理與生物安全:
病毒模型需在BSL-2/3實驗室操作(如WNV為BSL-3)。
對照設計:
佐劑對照組(僅CFA+PTx)、空白對照組(PBS注射)。
動態監測:
EAE模型需每日評分,病毒模型監測體重和神經癥狀。
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