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青光眼動物模型構建

青光眼動物模型構建

簡要描述:
青光眼動物模型構建:青光眼動物模型是研究眼壓升高、視神經損傷及視網膜神經節細胞(RGC)死亡機制的核心手段

更新時間:2025-07-11

訪問量:6

廠商性質:其他

一、青光眼動物模型構建分類與選擇

1. 高眼壓模型(模擬原發性開角型青光眼)

模型類型適用動物造模方法優缺點
激光誘導大鼠、小鼠、兔氬激光光凝房角(需前房注射印度墨汁增強吸收)
- 參數:50-100 μm光斑,0.1-0.5 s,50-100 mW
? 可精確控制眼壓升高幅度
? 需熟練操作,可能引發炎癥反應
微球注射小鼠、大鼠- 前房注射聚苯乙烯微球(10 μm,5-10 μL,阻塞小梁網)
- 可聯合viscoelastic凝膠延長高眼壓
? 操作簡單,眼壓穩定維持2-4周
? 需定期監測眼壓(Tonolab)
激素誘導兔(新西蘭白兔)- 地s米松滴y液(0.1%,每日2次,持續4-6周)? 模擬糖皮質激素性青光眼
? 僅適用于兔,眼壓升高較緩慢

2. 視神經損傷模型(模擬青光眼性視j病變)

模型類型適用動物造模方法應用場景
視神經鉗夾大鼠(SD/Wistar)- 手術暴露視神經,用顯微血管夾(壓力50-70 g)夾持5-10秒? 直接模擬軸突損傷
? 需開顱操作,損傷不可逆
NMDA興奮毒性小鼠、大鼠- 玻璃體內注射NMDA(20-40 nmol/μL,2 μL)誘導RGC凋亡? 快速誘導RGC死亡(24-72小時)
? 不涉及眼壓升高

3. 遺傳性青光眼模型

  • DBA/2J小鼠:自發突變導致虹膜萎s、房角關閉,眼壓逐漸升高(6-12月齡)。

    • 特點:模擬原發性閉角型青光眼,需長期觀察。

  • Myocilin突變小鼠:過表達人突變MYOC基因(如Tyr437His),誘導小梁網功能障礙。


二、青光眼動物模型構建關鍵實驗步驟與注意事項

1. 眼壓監測

  • 儀器選擇

    • 小鼠/大鼠:TonoLab或Tono-Pen(需麻醉,如異f烷)。

    • 兔:Goldmann壓平眼壓計(局部麻醉)。

  • 測量頻率:造模后每日或隔日測量,持續2-4周。

2. 視網膜神經節細胞(RGC)評估

  • 標記方法

    • 逆行標記:上丘注射熒光金(FluoroGold),1周后視網膜鋪片計數RGC。

    • 免疫染色:Brn3a(RGC特異性標記物)+ DAPI核染。

  • 功能檢測

    • 視網膜電圖(ERG):評估視網膜整體功能(需排除角膜混濁影響)。

    • 模式ERG(PERG):特異性反映RGC功能。

3. 視神j病理分析

  • 軸突計數:視神經橫截面透射電鏡(TEM)或甲苯胺藍染色。

  • 膠質細胞活化:GFAP免疫組化(星形膠質細胞增生標志)。


三、模型驗證與數據分析

  1. 成功標準

    • 眼壓持續升高>25 mmHg(小鼠)或>30 mmHg(大鼠)超過7天。

    • RGC數量減少≥30%(對照眼相比)。

  2. 對照組設計

    • 假手術組(僅做角膜穿刺無激光/注射)。

    • 對側未處理眼(自身對照)。


四、常見問題與解決方案

問題可能原因解決方案
眼壓升高不穩定微球阻塞不w全/激光能量不足增加微球濃度或激光功率,重復操作
角膜混濁影響檢測激光/注射損傷角膜使用透明角膜膏(如羥丙基甲基纖維素)保護
RGC標記失敗逆行標記時間不足延長熒光金擴散時間至7-10天


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