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呼吸合胞病毒動(dòng)物模型構(gòu)建

呼吸合胞病毒動(dòng)物模型構(gòu)建

簡(jiǎn)要描述:
呼吸合胞病毒動(dòng)物模型構(gòu)建:呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)是導(dǎo)致嬰幼兒下呼吸道感染的主要病原體,構(gòu)建合適的動(dòng)物模型對(duì)研究其致病機(jī)制、免疫應(yīng)答及藥物/疫苗評(píng)價(jià)至關(guān)重要

更新時(shí)間:2025-07-11

訪問(wèn)量:9

廠商性質(zhì):其他

一、呼吸合胞病毒動(dòng)物模型構(gòu)建選擇依據(jù)

動(dòng)物種類適用場(chǎng)景優(yōu)缺點(diǎn)
棉鼠經(jīng)典模型,支持RSV高效復(fù)制,模擬人類病理特征(細(xì)支氣管炎)? 高病毒載量
? 需特殊飼養(yǎng)(無(wú)病原體環(huán)境)
BALB/c小鼠廣泛用于免疫機(jī)制研究,對(duì)RSV敏感(需幼鼠或免疫抑制處理)? 成本低、工具鼠品系多
? 病毒復(fù)制有限(需高滴度接種)
恒河猴接近人類感染,用于疫苗臨床前評(píng)價(jià)? 生理相似性高
? 倫理和成本限制
雪貂研究RSV與流感共感染或氣道生理變化? 呼吸生理接近人類
? 病毒適應(yīng)性需驗(yàn)證

二、呼吸合胞病毒動(dòng)物模型構(gòu)建核心步驟

1. 病毒準(zhǔn)備
  • 毒株選擇

    • 實(shí)驗(yàn)室株(如RSV A2、Long株)或臨床分離株(如RSV B/ON1)。

    • 病毒擴(kuò)增:HEp-2細(xì)胞培養(yǎng),滴度≥1×10? PFU/mL(空斑試驗(yàn)驗(yàn)證)。

2. 動(dòng)物感染
  • 接種途徑

    • 麻醉動(dòng)物(異f烷),垂直滴鼻(50 μL,含1×10?–10? PFU病毒)。

    • 幼鼠模型(<7日齡):無(wú)需麻醉,直接滴鼻(3–5 μL)。

    • 鼻內(nèi)接種(最c用):

    • 氣管內(nèi)接種(精準(zhǔn)下呼吸道感染):需手術(shù)暴露氣管,注射病毒液(適用于棉鼠或猴)。

3. 感染后監(jiān)測(cè)
  • 病毒載量檢測(cè)

    • 采集肺組織(感染后3–5天峰值期),勻漿后qPCR檢測(cè)RSV N基因或噬斑試驗(yàn)。

  • 病理評(píng)估

    • 肺組織H&E染色:細(xì)支氣管周圍炎癥、上皮細(xì)胞壞死評(píng)分(0–4分)。

    • 免疫組化:RSV F蛋白染色定位病毒分布。

  • 免疫應(yīng)答分析

    • 肺泡灌洗液(BALF):細(xì)胞計(jì)數(shù)(中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞)、ELISA檢測(cè)IL-6、IFN-γ等。

    • 脾臟/淋巴結(jié):流式細(xì)胞術(shù)分析T細(xì)胞亞群(CD4+/CD8+)。


三、模型優(yōu)化策略

1. 增強(qiáng)病毒復(fù)制(小鼠模型)
  • 免疫抑制預(yù)處理

    • 環(huán)磷x胺(100 mg/kg,腹腔注射)或抗IFNAR1抗體(阻斷I型干擾素應(yīng)答)。

  • 幼鼠優(yōu)先:<7日齡小鼠因免疫系統(tǒng)未成熟,病毒復(fù)制更顯著。

2. 模擬重癥感染
  • 高滴度病毒(≥10? PFU/只)或免疫缺陷鼠(如STAT1?/?)。

  • 繼發(fā)細(xì)菌感染:RSV感染后接種肺炎鏈球菌(模擬臨床并發(fā)癥)。

3. 疫苗評(píng)價(jià)模型
  • 攻毒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

    • 免疫后4周接種RSV,比較肺病毒載量(疫苗組 vs 佐劑對(duì)照組)。

    • 注意:甲醛滅活RSV疫苗可能引發(fā)Th2型免疫偏移(嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn))。


四、注意事項(xiàng)

  1. 生物安全:RSV操作需在BSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,動(dòng)物飼養(yǎng)需獨(dú)立通風(fēng)籠具(IVC)。

  2. 對(duì)照設(shè)置

    • 陰性對(duì)照(PBS接種)、滅活病毒對(duì)照(評(píng)估非特異性炎癥)。

  3. 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)

    • 體重下降(>20%需安l死)、呼吸頻率(全身體積描記法)。

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