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肺炎克雷伯菌感染模型構建

肺炎克雷伯菌感染模型構建

簡要描述:
肺炎克雷伯菌感染模型構建:是導致肺炎、血流感染和尿路感染的重要病原體,其動物模型廣泛用于研究致病機制、宿主免疫應答及抗菌藥物評價

更新時間:2025-07-11

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廠商性質:其他

一、肺炎克雷伯菌感染模型構建選擇依據

感染類型推薦動物接種途徑研究重點
肺炎模型C57BL/6小鼠鼻內/氣管內接種肺部炎癥、細菌清除率
敗血癥模型BALB/c小鼠尾靜脈注射全身炎癥反應、器官損傷
尿路感染模型C3H/HeN小鼠膀胱內灌注膀胱定植、腎侵襲性
肝膿腫模型糖尿病小鼠門靜脈注射高毒力株(hvKP)的致病機制

二、肺炎克雷伯菌感染模型構建核心實驗步驟

1. 菌株準備

  • 菌株選擇

    • 標準株:ATCC 43816(K2血清型)

    • 高毒力株(hvKP):NTUH-K2044(K1血清型,含magA基因)

  • 培養條件

    • LB培養基,37℃振蕩培養至對數期(OD600≈0.6,~10? CFU/mL)。

    • PBS洗滌2次,調整濃度至目標CFU(如10?–10? CFU/50 μL)。

2. 動物感染

(1)肺炎模型(呼吸道感染)

  • 鼻內接種(無需麻醉):

    • 小鼠仰臥固定,垂直滴鼻(50 μL菌液,含10?–10? CFU)。

  • 氣管內接種(精準下呼吸道感染):

    • 麻醉后暴露氣管,注射30 μL菌液(需手術經驗)。

(2)敗血癥模型(全身感染)

  • 尾靜脈注射

    • 100 μL菌液(10?–10? CFU),監測72小時生存率。

(3)尿路感染模型

  • 經尿道灌注

    1. 麻醉小鼠,導尿管插入膀胱。

    2. 注入50 μL菌液(10? CFU)并夾閉尿道1小時。

(4)肝膿腫模型(需糖尿病小鼠)

  • 鏈脲佐菌素(STZ)預處理

    • 腹腔注射STZ(50 mg/kg×5天),血糖>300 mg/dL后接種。

  • 門靜脈注射

    • 手術暴露門靜脈,注射100 μL菌液(10? CFU)。


三、感染后監測與分析

1. 細菌負荷檢測

  • 組織勻漿法

    • 肺/肝/脾組織稱重,勻漿后梯度稀釋涂板(LB瓊脂),24小時后計數CFU。

  • 血液培養(敗血癥模型):

    • 尾靜脈采血100 μL,鋪板檢測菌血癥。

2. 病理與免疫分析

  • 組織病理

    • 4%多聚甲醛固定,H&E染色評估炎癥(中性粒細胞浸潤、膿腫形成)。

  • 細胞因子檢測

    • ELISA測定血清或肺灌洗液中IL-6、TNF-α水平。

3. 生存實驗

  • 記錄感染后7天內生存率,繪制Kaplan-Meier曲線(Log-rank檢驗)。


四、模型優化策略

1. 增強感染效率

  • 免疫抑制預處理

    • 環磷x胺(100 mg/kg)或抗中性粒細胞抗體(如抗-Ly6G)提高細菌定植。

  • 黏液溶解劑

    • 接種前30分鐘滴注N-乙酰半胱a酸(NAC,10%),破壞呼吸道黏液屏障。

2. 模擬臨床耐藥菌感染

  • 耐藥株構建

    • 選擇臨床分離的碳青霉烯耐藥株(如KPC-KP),調整接種劑量(10?–10? CFU)。


五、注意事項

  1. 生物安全

    • 高毒力株(hvKP)需在BSL-2+條件下操作。

  2. 倫理終點

    • 體重下降>20%或嚴重呼吸困難時需安樂s。

  3. 對照設置

    • 空白對照(PBS接種)、減毒株對照(如ΔwcaG突變體)。


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