一、CDX模型構建的核心特點
對比項 | CDX模型 | PDX模型 |
---|---|---|
細胞來源 | 腫瘤細胞系(如A549、HCT116) | 患者新鮮腫瘤組織 |
構建周期 | 2–6周 | 3–12個月 |
成本 | 低 | 高 |
應用場景 | 藥物篩選、機制研究 | 個體化治療、臨床轉化研究 |
二、CDX模型構建流程
1. 腫瘤細胞準備
細胞系選擇:
肺癌:A549(非小細胞肺癌)、H1975(EGFR突變)
結直腸癌:HCT116、SW480
乳腺癌:MCF-7(ER+)、MDA-MB-231(三陰性)
常用細胞系(示例):
需定期STR鑒定,避免交叉污染。
細胞培養:
使用含10% FBS的培養基(如DMEM/RPMI-1640),傳代至對數生長期。
胰m消化后計數,調整細胞濃度(通常1×10?–5×10? cells/mL)。
2. 實驗動物選擇
免疫缺陷鼠:
裸鼠(BALB/c nude):T細胞缺陷,適合大多數實體瘤。
NSG(NOD-scid IL2Rγ?/?):高度免疫缺陷,適合低成瘤性細胞。
飼養環境:SPF級屏障系統,避免感染。
3. 移植方法
(1) 皮下移植(最c用)
步驟:
麻醉小鼠(異f烷或腹腔注射戊巴b妥鈉)。
背部或側腹皮膚消毒(酒精+d伏)。
皮下注射腫瘤細胞懸液(100–200 μL,含1×10?–5×10? cells)。
觀察注射部位是否形成明顯皮丘(避免漏液)。
優點:操作簡單,易于監測腫瘤體積。
(2) 原位移植(模擬腫瘤微環境)
示例:
肝癌:脾臟注射(細胞遷移至肝)。
肺癌:氣管內注射或尾靜脈注射(肺轉移模型)。
乳腺癌:乳腺脂肪墊注射(4號乳頭周圍)。
優點:更接近臨床病理特征,但手術難度較高。
(3) 尾靜脈注射(轉移模型)
注射1×10?–1×10? cells(100 μL PBS),4–6周后解剖檢測肺/肝轉移灶。
4. 模型監測與數據分析
腫瘤體積測量:
游標卡尺測量長徑(L)和短徑(W),按公式計算:
每周測量2–3次,體積達1000–1500 mm3時需終止實驗(倫理限制)。
終點指標:
腫瘤重量:解剖后稱重。
組織學分析:H&E染色、Ki-67(增殖)、TUNEL(凋亡)。
分子檢測:qPCR/WB檢測靶基因表達。
三、CDX模型的應用
1. 抗腫瘤藥物篩選
分組設計:對照組(PBS)、實驗組(化療藥/靶向藥)。
評價指標:抑瘤率()、生存期。
2. 基因功能研究
構建穩定敲除/過表達細胞系(如CRISPR-Cas9),比較成瘤能力差異。
3. 免疫治療模型(需人源化小鼠)
共移植人PBMC或免疫檢查點抑制劑(如抗PD-1抗體)。
四、常見問題與解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
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腫瘤不成瘤 | 細胞活性低/接種量不足 | 提高細胞數(5×10? cells),改用NSG小鼠 |
腫瘤生長不均勻 | 注射技術不穩定 | 統一由同一操作者注射,避免氣泡 |
動物死亡或感染 | 手術創傷/無菌操作不當 | 術后抗生素預防(如恩n沙星) |